Ludger 聚糖释放试剂盒(Glycan Release Kits)的应用：
For release of glycans from glycoprotein therapeutics
糖蛋白中释放聚糖
Ludger 聚糖释放试剂盒(Glycan Release Kits)有三种：
一、N-和O-聚糖释放试剂盒
LudgerLiberateTM Hydrazinolysis Glycan Release Kit for N- and O-Glycan Release
(Cat# LL-HYDRAZ-A2)
For release of N + O-linked glycans from glycoprotein therapeutics.
1. 应用：糖蛋白释放N-和O-聚糖
2. 检测样本数量：12个糖蛋白样本
3. 样本量：1mg以上
4. 样本：Biopharmaceutical glycoproteins 糖蛋白
5. 运输及保存：常温运输，4度保存，避光，可保存18个月
6. 试剂盒成分：
|
Cat. #
|
Item
|
Quantity
|
|
LL-HYDRAZINE-01
|
Hydrazinolysis Release Reagent
酰肼释放试剂
|
2 x 3ml
|
|
LL-BICARB-01
|
Solid sodium bicarbonate
固态碳酸氢钠
|
2 x 0.33 g
|
|
LL-OCTANOL-01
|
Octanol
正辛醇
|
2 x 0.2 ml
|
|
LL-ACETANHYD-01
|
Acetic anhydride
醋酸酐
|
2 x 0.5 ml
|
|
LL-TFA-5PC-01
|
TFA solution
trifluoroacetic acid溶液
|
2 x 4 ml
|
|
LC-EB20-01
|
LudgerClean™ EB20 cartridges
LudgerClean™ EB20色谱柱
|
2 x 6 cartridges
|
|
LC-EB20-WASHA-01
|
EB20 Wash A Solution
EB20 洗脱试剂A
|
2 x 12 ml
|
|
LC-EB20-WASHB-01
|
EB20 Wash B Solution
EB20 洗脱试剂B
|
2 x 12 ml
|
|
LC-CEX-H-01
|
LudgerClean™ CEX cartridges
LudgerClean™ CEX色谱柱
|
2 x 6 cartridges
|
|
LL-WASTEV-01
|
Wash waste vials
洗涤管
|
2 x 6 vials
|
|
LL-REACT-01
|
Glass reaction vials with PTFE lined caps
带聚四氟乙烯盖玻璃反应管
|
2 x 6 vials
|
|
LL-COLLV-01
|
Glass collection vials with PTFE lined caps
带聚四氟乙烯盖玻璃采集管
|
2 x 6 vials
|
N-和O-聚糖释放试剂盒使用操作步骤：
1. 样品准备：准备糖蛋白或糖肽样本，需先去除干扰多肽释放的污染物，如盐、洗涤剂、染料等，获得比较纯的糖蛋白
2. 干燥样本：将样本放置在反应管中，冷冻干燥或离心蒸发至完全干燥
3. 加肼试剂：将肼试剂加入反应管中，盖上盖漩涡混匀
4. 孵育：孵育样本，让聚糖释放。
O-Mode Hydrazinolysis： Incubate 6 hours at 60℃
N-Mode Hydrazinolysis (Fast)： Incubate 5 hours at 100℃
N-Mode Hydrazinolysis (Normal)： Incubate 16 hours at 85℃
N+O Mode Hydrazinolysis ： Incubate 16 hours at 60℃
5. 冷却样本至室温
6. 离心蒸发去除多余的酰肼
7. 乙酰化作用：加醋酸酐乙酰化游离的氨基，得到β-乙酸肼（根据糖苷类型N-Glycans，O-Glycans或N+O-Glycans，操作方式有差别，详见说明）
8. 酸化和纯化游离的聚糖根据糖苷类型N-Glycans，O-Glycans或N+O-Glycans，操作方式有差别，详见说明）：
1）N-聚糖：用EB20聚糖纯化柱(Cat # LC-EB20-01)
2）O-聚糖或N+O-聚糖：用CEX聚糖纯化柱(Cat# LC- CEX-H-01)
9. 保存或分析释放的聚糖：可直接分析或荧光标记分析
二、N-聚糖释放试剂盒
Ludger Liberate MR(Membrane Release) Glycan Release Kit（Cas# LL-MR-A2）
For immobilizing, clean up and PNGaseF mediated release of glycans from glycoproteins
应用：固定、清除和PNGaseF（肽 N-糖苷酶F）介导释放糖蛋白中的N-聚糖。固定糖蛋白可以去除干扰聚糖分析的低分子量溶剂/缓冲组分，例如海藻糖。
PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连聚糖（x=H或寡糖）
肽 N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一种酰氨酶，可以在 N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割
样品数：96孔板，适用于检测96个样本
样本及样品量：样本为糖蛋白，每孔>100ug糖蛋白，具体根据样本来定
储存及运输：试剂盒中成分依据说明书储存，常温运输
三、O-聚糖快速释放试剂盒
Ludger Liberate Orela O-Glycan Release Kit （Cas# LL-ORELA-A2）
For release of O-linked glycans from glycoprotein therapeutics.
应用：用于释放糖蛋白中的O-聚糖，释放的聚糖有游离的末端，通过还原胺化反应可以做荧光标记进行检测。
样品数：可检测12个糖蛋白样本
样品及样本量：Biopharmaceutical glycoproteins 生物制药糖蛋白，每个样本的量>1mg
储存及运输：试剂盒中成分依据说明书储存，常温运输
Ludger糖基化分析和检测步骤图如下，可根据下图来选择Ludger产品：
