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行业应用

cellendes 3D细胞仿生水凝胶系统使用操作步骤

点击次数:4594 来源网站: 发布时间:2015-11-17

德国cellendes的3D细胞仿生水凝胶系统是一套用于3D细胞培养时构建细胞外基质组分的试剂。使用者可以利用这些试剂控制细胞外环境,设计适合细胞生存的3D系统。

3D细胞仿生水凝胶系统与活体细胞外基质相似,采用该系统可使体外细胞培养更接近体内的生理特征,是基础研究、药物筛选和再生医学等领域细胞功能研究的理想选择。

 

 

一、使用cellendes 3D细胞仿生水凝胶系统时的注意事项:

 

1. 所有步骤均在无菌环境下操作。
2. 一般选择使用10x CBpH 5.5,10x CBpH 5.5不适合时,才会使用10x CBpH 7.2 。但是使用10x CBpH 7.2时,凝胶形成的速度很快,降低CB的pH值,可以减缓凝胶形成的速度,可以混合10x CBpH 5.5和10x CBpH 7.2 。


CBpH 5.5和CBpH 7.2混合后CB的pH值(详见说明书p10)


3. 细胞悬液: PBS或培养基悬液
4.  Mal-PVA或Mal-Dextran溶解后冰浴上使用。溶解后应放于-80℃保存,使用时避免反复冻融,如果短期内使用,可以4℃放置(1周左右)
5. PEG-link和CD-link不要长时间暴露在空气中

 

 

二、使用cellendes 3D细胞仿生水凝胶系统时实验前准备:

 

1. 解冻、溶解3D水凝胶组分(详见说明书),保证全部溶解
2. 如果3D水凝胶需添加RGD肽(详见说明书):
A. 用水溶解RGD肽,使终浓度是3.0mmol/L
B. 如需比较RGD肽不同浓度的效果,会使用硫代甘油,需将硫代甘油:水=1:6.7溶解,使终浓度是3.0mmol/L
3. 保证Mal-PVA或Mal-Dextran 冰浴上
4. 准备细胞悬液(PBS或培养液),建议细胞悬液浓度时2-4 x106/ml,使最终浓度时10000-20000个细胞/30ul

 

 

三、无RGD肽时cellendes 3D细胞仿生水凝胶系统实验操作:

 

注:需保证马来酰亚胺基团(Mal- )和硫醇基团(SH- )等量
可以预实验决定凝胶强度

注:CBpH5.5和细胞悬液的量是不变的,为了保证等渗条件

 

实验步骤如下:


A.按上表混合水、CBpH5.5、Mal-PVA(或Mal-Dextran)、细胞悬液于一管(管1)中
B.将PEG-link(或CD-link)滴加到培养皿表面
C. 用吸头吸出管1中的组分,与培养皿上的PEG-link(或CD-link)混合,快速吹打3-4次
D. 避免产生气泡,放置至少一分钟(3-5min),等待凝胶形成
E. 一旦凝胶形成,轻轻加培养液至覆盖住凝胶,盖上培养皿盖,至合适的温度孵育
F. 两个小时后更换新培养基

 

 

四、用RGD肽时cellendes 3D细胞仿生水凝胶系统实验操作:

 

一般情况下1mmol/l或低于1mmol/l的RGD肽,就可以提供足够的粘附力
当需比较RGD肽浓度以及是否需要使用RGD肽时,需用到硫代甘油
下表中列举的是:马来酰亚胺基团(Mal--)=硫醇基团(SH--)=5mmol/l,选择最佳RGD肽浓度时,需用硫代甘油来调节

 如确定交联强度是5mmol/l,可按下表预实验RGD肽浓度

 

实验步骤如下:

                                          实验操作示意图(30ul体系)

 

A. 按上表混合水、CBpH5.5、Mal-PVA(或Mal-Dextran)、细胞悬液于一管(管1)中
B. 添加RGD肽和硫代甘油于管1中,快速混匀,室温放置5-10min,有足够的时间使RGD peptide共价结合到马来酰亚胺基团(Mal- )上
C. 将PEG-link(或CD-link)滴加到培养皿表面
D. 将细胞悬液添加到管1中
E. 用吸头吸出管1中的组分,与培养皿上的PEG-link(或CD-link)混合,快速吹打3-4次
F. 避免产生气泡,放置至少一分钟(3-5min),等待凝胶形成
G. 一旦凝胶形成,轻轻加培养液至覆盖住凝胶,盖上培养皿盖,至合适的温度孵育
H. 两个小时后更换新培养基

 

 

相关产品信息链接:

1.3D仿生水凝胶试剂盒——德国cellendes

2.如何选择cellendes 3D水凝胶试剂盒

3.cellendes水凝胶三维细胞培养产品常见问题

 

 

其它3D产品介绍链接:

1.3D细胞悬滴培养板--瑞士insphero

2.3D细胞毒性检测试剂盒--瑞士insphero

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4.3D Insert-PCL(聚已内酯3D培养支架培养板)

 

 

北京群晓科苑生物技术有限公司是德国cellendes的独家授权代理商。主推cellendes的3D细胞仿生水凝胶系统。同时,北京群晓科苑还代理insphero的3D悬滴培养板,3D Biotek的3D Insert-PCL/PS支架,您如果对三维(3D)细胞培养感兴趣,欢迎留言或致电我公司:400-8858-216.

 

 

 

 

 
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